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Enseignements
DESS Cytologie Moléculaire Appliquée
Correction du sujet d'examen 2001/2002
Enseignant : Marie-Paule Lefranc

Article

Brown V. et al. Cell 107, 477-487 (2001) PMID:11719188

Introduction

Hypothèse de départ

Lorsque la protéine FMRP est absente, les ARNm normalement associés aux complexes FMRP-mRNP ne sont pas traduits, ce qui, dans le cerveau, entraîne une absence de certains protéines et une perte des facultés cognitives.

Approche expérimentale

Pour tester cette hypothèse, les auteurs ont utilisé des puces à ADN (microarrays, chips) afin d'identifier les messagers sélectivement associée aux complexes FMRP-mRNP dans le cerveau de souris.

Analyse par puces à ADN

  1. Isolement de l'ARN total de lysats de cerveaux de souris normales (wt) et de souris knock-out (KO).
    • 1/5 du volume de chaque lysat est utilisé pour la transcription reverse en ARNc.
    • 4/5 du volume est utilisé pour l'immunoprécipitation décrite en 2.
  2. Immunoprécipitation spécifique des FMRP-mRNP, à partir des lysats de cerveaux de souris (wt) et (KO), grâce à l'anticorps monoclonal mAb anti-mouse FMRP (1G1-1).

Cette immunoprécitipation est suivie de la transcription reverse en ARNc.
On obtient ainsi 4 fractions d'ARNc : ARNc (wt), ARNc (KO), ARNc (wt-IP), ARNc (KO-IP).
Chaque fraction d'ARNc est ensuite hybridée sur des puces à ADN.

Puces à ADN utilisées

Microarrays Affymetrix.

Résultats

diagramme

Diagramme de Venn. Détermination du nombre d'ARN associés aux FMRP-mRNP.

Les résultats montrent que 15% des 2.902 gènes (wt-IP versus KO-IP) sont identiques à 82% des 527 gènes (wt-IP versus wt). L'intersection représente 432 gènes, ou 3,9% des 11.067 ARN exprimés.

Interprétation

Ces résultats indiquent que ~4% des messagers du cerveau semblent associés aux FMRP-mRNP ("enrichis" = au moins une augmentation de 4 fois).